日韩在线一区不卡免费,日韩欧美亚洲精品一级,高清黄色三级丰满大片,亚洲一区二区三区黄片

產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

首頁 > 技術(shù)與支持 > 活性蛋白試劑盒提取操作步驟
活性蛋白試劑盒提取操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):1038 更新時間:2022-04-19

本試劑盒用于從哺乳動物組織和培養(yǎng)細(xì)胞中提取具有活性的全蛋白, 用含有蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液

Lysis Buffer 勻漿裂解組織或細(xì)胞,作用溫和,提取過程簡便。獲得的全蛋白可用于 Western Blot、免疫共沉淀和酶 的活性的測定的等后續(xù)研究,但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究,因本試劑盒中包括這兩種酶的抑制劑。 應(yīng)用方面:可用于 Western Blot、免疫共沉淀和酶活性測定等后續(xù)研究。

操作步驟

Ⅰ、實體組織蛋白的提取

1、在每 mL 冷 Lysis Buffer 加入 10 μL 磷酸酶抑制劑,1 μL 蛋白酶抑制劑和 10μL PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待 用;

2、 每 100mg 固體組織置于培養(yǎng)皿中,手術(shù)剪剪碎成 3mm×3mm 左右的小塊,加入 0.5~1 mL 冷 Lysis Buffer,玻 璃勻漿器上下手動勻漿 15 次,注意低溫操作;

3、取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到 1.5mL 預(yù)冷的離心管,離心 10000 轉(zhuǎn)/分,4℃離心 5 min;

4、取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford 法、BCA 法);

5、分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。


Ⅱ、培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1、 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,加入 10mL/150mm 培養(yǎng)板的冷 PBS 洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;

2、  懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中,1000 轉(zhuǎn)/分離心 10 min,再用10mL/150mm 培養(yǎng)板的冷 PBS,1000 轉(zhuǎn)/分離心 5 min 洗兩次;

3、 在每 mL 冷 Lysis Buffer 加入 10μL 磷酸酶抑制劑,1μL 蛋白酶抑制劑和 10μL PMSF(用戶自配:濃度 100mM, 溶于異丙醇),混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用;

4、 在上述培養(yǎng)板或離心管的細(xì)胞中,加入上述配制好的冷 Lysis Buffer;

5、冷室或冰上操作,貼壁細(xì)胞用細(xì)胞刮子刮下,皆 Lysis Buffer 一同轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中;懸浮培養(yǎng)或裂解前刮下的貼壁細(xì)胞皆 Lysis Buffer 一同轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中;

6、置于 4℃搖床平臺上,溫和振蕩 15 min;

7、14,000rpm,4℃離心 15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford 法、BCA 法);

8、  分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

注意事項:

所有接觸樣品的用具及試劑均需預(yù)冷。我們在提取蛋白后,如有必要,可透析除去表面活性劑。


日韩亚洲欧美综合在线-成人在线网站在线观看| 国产美女裸露无遮挡双奶网站-国产精品色午夜视频免费看| 97香蕉久久国产在线观看-麻豆黄色广告免费看片| 日韩毛片在线免费人视频-超碰中文字幕av在线| 久久99国产综合精品女人-日韩一区二区三区在线不卡| 亚洲综合av一区二区三区-高潮又爽又黄无遮挡激情视频| 国产av一区二区三区日韩接吻-av网址在线播放网站| 国产传媒中文字幕在线观看-午夜福利视频在线播放观看| 91九色蝌蚪丝袜人妻-国产精品9999网站| 欧美日韩亚洲1区2区-黄污视频在线观看不卡| 精品少妇一区二区18-一区二区三区日韩在线播放| 天天干天天日天天射天天舔-精品香蕉视频官网在线观看| 欧美日韩国产综合四区-爆操极品尤物熟妇14p| 久久精品国产亚洲av湖南-竹菊精品一区二区三区| 欧美精品午夜一二三区-a屁视频一区二区三区四区| 国产美女裸露无遮挡双奶网站-国产精品色午夜视频免费看| 国产aa视频一区二区三区-国产精品久久久久久久毛片动漫| 精品国产综合一区二区三区-蜜臀一区二区三区刺激视频| 国产欧美日本一区二区-一区二区三区亚洲在线播放| 国产一级片久久免费看同-麻豆精品尤物一区二区青青| 人妻少妇无乱码中文字幕-人成免费视频一区二区| 91麻豆免费在线视频-欧美中文天堂在线观看| 欧美日韩国产亚洲免费-肉体粗喘娇吟国产91| 亚洲一区二区三在线观看-国产精品亚洲а∨天堂123| 国产欧美日韩中文字幕在线-国产伊人一区二区三区四区| 色综合色综合久久综合频道-埃及艳后黄版在线观看| 日本欧美在线视频观看-国产一区二区三区无码下载快播| 91精品国产无线乱码在线-999精品视频免费看| 97香蕉久久国产在线观看-麻豆黄色广告免费看片| 欧美字幕一区二区三区-好吊妞欧美一区二区在线观看| 交换朋友的妻子中文字幕-日本美女8x8x8x8| 看肥婆女人黄色儿逼视频-秋霞电影一区二区三区四区| 亚洲福利视频免费观看-中文字幕日本不卡一区二区| 国模自慰一区二区三区-日韩一级黄色片天天看| 亚洲日本一区二区三区黄色电形-中文字幕乱码免费熟女| 欧美视频在线观看国产专区-亚洲91精品在线观看| 十九禁止观看无码视频-亚洲国产激情福利专区| 日本欧美在线视频观看-国产一区二区三区无码下载快播| 国产福利视频一区二区三区-日韩人妻中文视频精品| 国产传媒中文字幕在线观看-午夜福利视频在线播放观看| 精品老熟妇一区二区三区-日韩丰满一区二区三区|